通用PCR試劑盒無需常規(guī)核酸提取即可進(jìn)行檢測
點擊次數(shù)：729 更新時間：2021-04-14
通用PCR試劑盒指的是在PCR進(jìn)行的同時，對其過程進(jìn)行監(jiān)測的能力（即實時）。因此，數(shù)據(jù)可在PCR擴(kuò)增過程中，而非PCR結(jié)束之后，進(jìn)行收集。這為基于PCR的DNA和RNA定量方法帶來了變革。
在實時熒光定量PCR中，反應(yīng)以循環(huán)中檢測到目標(biāo)擴(kuò)增的時間點為特征，而非在一定循環(huán)數(shù)后目標(biāo)分子素計的擴(kuò)增量。目標(biāo)核酸的起始拷貝數(shù)越高，則會越快觀察到熒光的顯著增加。相反，終點法檢測（也稱“讀板檢測”）測量的是PCR循環(huán)結(jié)束時素計的PCR產(chǎn)物量。
通用PCR試劑盒無需常規(guī)核酸提取，僅需對樣品進(jìn)行簡單研磨、離心處理，即可開始后續(xù)核酸檢測。在保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提下，簡化了檢測步驟，將檢測時間縮短至不到1小時，成為適合于屠宰場、養(yǎng)殖場的技術(shù)。
通用PCR試劑盒“變性-退火-延伸”三個步驟的實現(xiàn)方法是：
1、變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；
2、退火：退火也叫復(fù)性，模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，在這個溫度下，模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；所謂引物，是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段，通過引物找到模板DNA的相應(yīng)位置，也就是確定了復(fù)制的起點；
3、延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按照堿基互補(bǔ)配對原則和半保留復(fù)制原理，就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。
希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解本試劑盒。
